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仪器使用前的准备
仪器校准
定期对便携式荧光定量PCR检测仪进行校准是确保数据可靠的基础。校准过程要严格按照仪器说明书进行,通常需要使用标准品或质控品。比如,使用已知浓度的核酸标准品,按照检测流程进行操作,记录仪器检测出的结果,与标准品的实际浓度进行对比。如果检测结果与实际浓度偏差较大,就需要对仪器进行调整,直至检测结果准确可靠。
校准周期应根据仪器的使用频率和环境条件来确定。如果仪器使用频繁,或者处于高温、高湿等恶劣环境中,校准周期应适当缩短,一般建议每月进行一次校准。
试剂与耗材检查
确保使用的试剂在有效期内,且保存条件符合要求。例如,荧光定量PCR试剂通常需要在-20℃或-80℃冰箱中保存,运输过程中也要使用干冰等保持低温。使用前要检查试剂的外观,如有浑浊、沉淀或变色等情况,应停止使用。
耗材如反应管、移液器枪头等要保证无菌、无污染。使用前可对反应管进行外观检查,确保无破损、无变形。同时,要使用与仪器配套的耗材,以保证检测的准确性。
样本采集与处理
规范样本采集
样本采集是影响检测结果的关键环节。以采集血液样本为例,要选择合适的采血部位和采血方法。一般可选择前腔静脉或耳静脉采血,使用一次性无菌注射器和采血管。采血过程中要避免溶血,因为溶血会释放出血红蛋白等物质,干扰PCR反应。
对于其他类型的样本,如组织、唾液等,也要按照相应的规范进行采集。采集组织样本时,要选取病变明显的部位,避免采集到坏死组织;采集唾液样本时,要让被采集者充分漱口,减少食物残渣和口腔细菌的干扰。
正确处理样本
采集到的样本要及时进行处理,防止样本中的核酸降解。对于血液样本,一般需要进行离心分离血清或血浆;对于组织样本,要进行研磨、匀浆等处理,释放出其中的核酸。
在样本处理过程中,要注意防止交叉污染。使用不同的样本处理工具,如移液器、离心管等,避免样本之间的相互污染。同时,操作人员要佩戴手套、口罩等防护用品,防止自身携带的微生物污染样本。
检测过程控制
严格操作流程
按照仪器说明书和试剂盒的操作流程进行检测,不得随意更改步骤或参数。例如,在PCR反应体系中,要准确加入样本、试剂和引物探针,控制好反应体系的体积和浓度。反应温度和时间也要严格按照要求设置,如变性温度一般为95℃左右,退火温度根据引物的Tm值确定,延伸温度一般为72℃左右。
在加样过程中,要使用精确的移液器,确保加样量准确。加样时要小心操作,避免产生气泡,因为气泡会影响PCR反应的进行。
设置对照实验
在每次检测中,都要设置阴性对照、阳性对照和空白对照。阴性对照使用不含目标核酸的样本,用于检测试剂和操作过程中是否存在污染;阳性对照使用已知浓度的目标核酸样本,用于验证检测系统的灵敏度和准确性;空白对照使用不含样本和试剂的反应体系,用于检测仪器和环境的本底信号。
如果对照实验的结果不符合要求,如阴性对照出现阳性信号,说明检测过程中存在污染,需要重新进行检测。
仪器维护与保养
日常清洁
每次使用完便携式荧光定量PCR检测仪后,要及时进行清洁。用柔软的干布擦拭仪器表面,去除灰尘和污渍。对于仪器的光学部件,如光源、检测器等,要使用专用的镜头纸或无尘布轻轻擦拭,避免刮伤。
定期清理仪器的散热孔和风扇,防止灰尘堵塞,影响仪器的散热效果。可以使用吸尘器或小毛刷进行清理。
定期维护
定期对仪器进行全面的维护和检查,如检查仪器的电源、线路是否正常,仪器的各个部件是否松动或损坏等。如果发现仪器存在问题,要及时联系专业维修人员进行维修。
按照仪器说明书的要求,定期对仪器进行性能测试和校准,确保仪器始终处于良好的工作状态。
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