非洲猪瘟检测仪怎么用?新手易踩的坑有哪些?

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　　对于初次接触非洲猪瘟检测仪的新手而言，掌握基本操作流程只是基础，更重要的是避开操作中的常见误区，这些“坑"往往是导致检测结果不准确的主要原因。结合基层检测实践，新手使用仪器时需重点关注样本处理、试剂操作、仪器设置三个环节的常见问题。

　　样本处理环节最易出现“样本选取不当"和“核酸提取不规范"的问题。新手常错误地选择病变不明显的样本，如仅采集生猪的粪便样本检测非洲猪瘟，而粪便中病毒含量低且易受杂质干扰，正确的做法是优先选择血液、脾脏等病毒含量高的样本。核酸提取时，新手常因离心时间不足(低于3分钟)或试剂添加顺序错误，导致核酸提取不，建议严格按照试剂盒说明书步骤操作，提取完成后可通过紫外分光光度计检测核酸纯度，确保OD260/OD280值在1.8-2.0之间。

　　试剂操作环节的核心误区是“污染防控不到位"和“体系配制不准确"。PCR检测对污染极其敏感，新手常忽视“分区操作"原则，在同一区域完成试剂准备、样本处理和扩增检测，导致扩增产物污染试剂，出现假阳性结果。正确的做法是划分独立的试剂准备区、样本处理区和扩增区，各区使用专用的移液器和耗材，操作时穿戴一次性手套并及时更换。体系配制时，新手常因移液器操作不熟练导致试剂加样量偏差，建议使用量程匹配的移液器(如加样量5μL时使用10μL移液器)，加样前先吸打试剂3次润洗吸头，确保移液准确。

　　仪器设置和结果判读环节易出现“程序参数错误"和“结果解读片面"的问题。不同厂家的PCR试剂对应的退火温度、延伸时间不同，新手常直接使用仪器默认程序，未根据试剂说明书调整参数，导致扩增效率低。例如，某品牌试剂要求退火温度为60℃，若使用默认的55℃程序，会导致引物非特异性结合，出现假阳性。检测完成后，新手常仅根据CT值判断结果，忽视扩增曲线形态，若曲线出现非典型“S"型(如平台期不明显)，可能是样本污染或试剂失效导致，需重新检测。