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样品采集
选择采集部位:通常从疑似感染松材线虫病的松树树干、树枝、树皮等部位采集样品。树干可选取靠近基部或病变明显区域;树枝选取枯萎、变色部分;树皮则选取有松脂渗出、变色或有虫道痕迹的部位。
采集工具准备:准备好锋利的刀具、锯子、镊子、密封袋或离心管等工具。刀具和锯子要确保清洁,避免交叉污染。
采集操作:用刀具或锯子截取适量木材样本,一般长度为 5 - 10 厘米,直径 1 - 2 厘米。若采集树皮,可取 5 - 10 平方厘米大小。将采集的样品放入密封袋或离心管中,标注好采集地点、时间、树木编号等信息。
样品粉碎
粉碎设备选择:可使用组织研磨仪、粉碎机等设备。组织研磨仪能更均匀地粉碎样品,但价格相对较高;粉碎机操作简单,成本较低。
粉碎操作:将采集的样品放入粉碎设备中,加入适量的液氮(若设备允许),液氮可使样品迅速冷冻变脆,便于粉碎。启动粉碎设备,将样品粉碎成细小的颗粒状,一般粉碎至粉末状,粒度在 0.1 - 1 毫米左右。
核酸提取
提取试剂准备:根据所选的核酸提取试剂盒说明书,准备好相应的试剂,如裂解液、洗涤液、洗脱液等。
提取步骤:将粉碎后的样品转移至离心管中,加入适量的裂解液,充分混匀,使样品中的细胞破裂,释放出核酸。然后进行离心操作,去除杂质和细胞碎片。接着加入洗涤液,多次洗涤沉淀,去除残留的杂质。最后加入洗脱液,将核酸洗脱下来,收集到干净的离心管中。
核酸纯化(可选)
纯化目的:若提取的核酸中含有较多的杂质,如蛋白质、多糖等,可能会影响后续的检测结果,此时需要进行核酸纯化。
纯化方法:可使用柱式纯化法或磁珠纯化法。柱式纯化法是将核酸溶液加入到纯化柱中,通过离心等方式使核酸吸附在柱子上,去除杂质后再洗脱下来;磁珠纯化法是利用磁珠与核酸的特异性结合,将核酸从溶液中分离出来。
样品保存与运输
保存条件:处理好的核酸样品若不能立即进行检测,应将其保存在 -20℃或 -80℃的冰箱中,防止核酸降解。
运输要求:在运输过程中,要使用干冰或冰袋保持低温环境,确保样品的质量不受影响。同时,要做好样品的防护,避免样品泄漏或损坏。
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